北京
作者：寵物醫(yī)師網(wǎng)編委會
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揭秘血液涂片復(fù)查的重要性：精準(zhǔn)捕捉淋巴細(xì)胞微妙變化！
摘要
自動血液分析儀雖常規(guī)用于評估淋巴細(xì)胞濃度變化（如淋巴細(xì)胞減少/增多），但無法可靠檢測細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變或分類（如大淋巴細(xì)胞）。因此，人工血液涂片復(fù)查對淋巴細(xì)胞精準(zhǔn)評估至關(guān)重要。本文系統(tǒng)介紹了外周淋巴細(xì)胞生理學(xué)、淋巴細(xì)胞形態(tài)學(xué)變異以及導(dǎo)致淋巴細(xì)胞濃度變化的常見疾病。
一、前言
全血細(xì)胞計數(shù)（CBC）是基礎(chǔ)檢查的核心項目，可識別細(xì)胞濃度與形態(tài)變化，以輔助疾病診斷。自動血液分析儀雖能有效測定細(xì)胞濃度，但無法可靠評估形態(tài)學(xué)改變或細(xì)胞分類1。因此，血涂片復(fù)查對評估細(xì)胞形態(tài)及驗證儀器定量結(jié)果至關(guān)重要。本文聚焦淋巴細(xì)胞異常（形態(tài)及濃度變化為主），如果報告有淋巴細(xì)胞增多，應(yīng)進行血液涂片檢查。
血涂片復(fù)查指征
? 報告顯示淋巴細(xì)胞增多
? 單核細(xì)胞增多
? 疑似原始細(xì)胞（尤其淋巴細(xì)胞幼稚化或體積增大）
? 白細(xì)胞分布異常
觀察區(qū)域選擇：由于涂片的羽狀邊緣和體可能出現(xiàn)細(xì)胞畸變，應(yīng)在單層區(qū)域識別淋巴細(xì)胞，若淋巴細(xì)胞數(shù)量稀少，需檢查涂片體部等其他區(qū)域，對疑似低比例異常細(xì)胞病例，建議對整個涂片進行篩查。
二、淋巴細(xì)胞數(shù)量
淋巴細(xì)胞是外周血主要的單核細(xì)胞，承擔(dān)多種免疫功能，其來源于骨髓干細(xì)胞分化的T細(xì)胞或B細(xì)胞。
T細(xì)胞在胸腺發(fā)育，然后循環(huán)于血液或定植于淋巴結(jié)、脾臟等淋巴組織。健康犬貓外周血淋巴細(xì)胞以T細(xì)胞為主，它們負(fù)責(zé)細(xì)胞介導(dǎo)免疫，包括輔助性T細(xì)胞（CD4+）和細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CD8+）。
B細(xì)胞的發(fā)育場所因物種而異，B細(xì)胞在骨髓或特殊的淋巴組織（如回腸淋巴結(jié)，法氏囊）中發(fā)育。B細(xì)胞通過分泌免疫球蛋白（抗體）介導(dǎo)體液免疫。
不表達T/B細(xì)胞標(biāo)記物的細(xì)胞群，包括自然殺傷細(xì)胞（NK），它們在先天免疫系統(tǒng)中起重要的作用，尤其是抗病毒感染。光學(xué)顯微鏡不能可靠地區(qū)分淋巴細(xì)胞的不同亞群，但流式細(xì)胞術(shù)可以識別不同的細(xì)胞標(biāo)記物和受體（免疫表型）。
三、淋巴細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
在評估淋巴細(xì)胞的形態(tài)特征時，應(yīng)注意細(xì)胞大小以及細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的質(zhì)量（方框1）。與中性粒細(xì)胞相比，健康犬貓的正常淋巴細(xì)胞較小。
小淋巴細(xì)胞具有圓形至卵形核，染色質(zhì)致密團塊狀，無可見核仁，胞質(zhì)少至中等量，嗜堿性（圖1）。小淋巴細(xì)胞應(yīng)與有核紅細(xì)胞（nRBCs）區(qū)分開來（圖1）。用甲醇羅曼諾夫斯基染色比用水溶液快速染色（如DiffQuik）更容易觀察到(圖2)。
圖1：與小型淋巴細(xì)胞（箭頭所示）相比，有核紅細(xì)胞（箭頭所指）具有更多的細(xì)胞質(zhì)，其顏色與其他紅細(xì)胞相似，并且在后期階段，細(xì)胞核偏心定位，染色質(zhì)非常平滑且濃縮。犬血。改良魏氏染色，100倍物鏡。
圖2：顆粒性淋巴細(xì)胞（箭頭所示），其細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有精細(xì)的品紅色顆粒（箭頭所指），以及反應(yīng)性淋巴細(xì)胞，其細(xì)胞質(zhì)深嗜堿性（星號所示）。反應(yīng)性淋巴細(xì)胞與抗原刺激相關(guān)。犬血。改良魏氏染色，100倍物鏡。
反應(yīng)性改變特征包括胞質(zhì)量增多，深藍色染色（偶呈淡藍）；細(xì)胞核邊緣不規(guī)則或分葉（圖2和3）。這些形態(tài)學(xué)變化提示可能由炎癥、感染或其他原因刺激引起，致中、大淋巴細(xì)胞輕度增多。中/大淋巴細(xì)胞比例顯著升高，中等或較大的淋巴細(xì)胞，特別是染色質(zhì)開放和核仁突出的淋巴細(xì)胞中至重度擴增，提示淋巴增生性疾病，例如，淋巴瘤/白血?。▓D4）。
圖3：兩個大小不同的反應(yīng)性淋巴細(xì)胞，其細(xì)胞質(zhì)深嗜堿性。免疫刺激時可見少量此類細(xì)胞。犬血。瑞氏-吉姆薩染色，100倍物鏡。
圖4：來自一只V期淋巴瘤犬的大型淋巴細(xì)胞，其細(xì)胞質(zhì)中度嗜堿性，細(xì)胞核略不規(guī)則，染色質(zhì)精細(xì)，可見核仁（箭頭所示；染色略淺于周圍核染色質(zhì)）。注意，此形態(tài)并非淋巴瘤特有，也可能與急性白血病相似。犬血。瑞氏-吉姆薩染色，100倍物鏡。
淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)感染因子較罕見。犬瘟熱病毒包涵體可出現(xiàn)在白細(xì)胞和紅細(xì)胞中，包涵體呈圓形或不規(guī)則形，有單個或多個包涵體。在水溶性羅曼諾夫斯基染色（如快速染色）中，包涵體呈玻璃樣和嗜酸性，但在血液中呈一過性（圖5）。犬埃里希體桑椹胚在血液中很少檢出，感染急性期主要見于單核細(xì)胞，淋巴細(xì)胞罕見。桑葚胚呈圓形顆粒狀含嗜堿性胞質(zhì)包涵體，血小板偶爾覆蓋淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞；細(xì)焦放大是確保物體（即感染性包涵體）與淋巴細(xì)胞相關(guān)的關(guān)鍵。確診需結(jié)合血小板減少、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀等臨床表現(xiàn)。
（A）
（B）
（C）
圖5：一只感染犬瘟熱病毒的犬的血涂片。注意紅細(xì)胞（A）中的紫色細(xì)胞質(zhì)包涵體、一個中性粒細(xì)胞（B）中的包涵體，以及一個淋巴細(xì)胞（C），箭頭所示）中的玻璃樣淡嗜酸性包涵體。快速羅馬諾夫斯基染色，100倍物鏡。
導(dǎo)致淋巴細(xì)胞形態(tài)變化的先天性和遺傳性疾病很少遇到?！叭苊阁w貯積病”指由溶酶體功能障礙引起的代謝疾病的總稱，通常導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。有時，通過光顯學(xué)微鏡可以在中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中觀察到溶酶體及其內(nèi)容物。在這些情況下，溶酶體及其內(nèi)容物可以通過清晰的空泡變化或嗜堿性、顆粒狀（圓形至桿狀）細(xì)胞質(zhì)包涵體來區(qū)分。在黏多糖貯積癥和GM2神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥患者的血液中可見顆粒狀包涵體（圖6）。
圖6：一只患有黏多糖貯積癥的犬的血涂片。注意中性粒細(xì)胞（箭頭所示）和淋巴細(xì)胞（星號所示）中的嗜堿性顆粒狀細(xì)胞質(zhì)包涵體。瑞氏-吉姆薩染色，100倍物鏡。
四、淋巴細(xì)胞濃度變化
外周血中粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的濃度通常反映出骨髓的產(chǎn)生與組織中使用之間的平衡（從血液到組織的傳播通常是單向的，而無再循環(huán)）。相反，淋巴細(xì)胞可以在血液和淋巴組織之間循環(huán)。有關(guān)這些濃度變化的摘要，請參見框2。
五、總結(jié)
犬和貓外周血淋巴細(xì)胞的形態(tài)和濃度變化應(yīng)與臨床發(fā)現(xiàn)（例如患者的年齡、感染跡象、近期藥物或疫苗接種情況、淋巴組織異常/增大）相關(guān)聯(lián)。淋巴細(xì)胞減少通常被記錄為皮質(zhì)類固醇應(yīng)激反應(yīng)的一部分。淋巴細(xì)胞增多則通常與非特異性抗原刺激（反應(yīng)性）和淋巴增殖性疾?。ㄈ绨籽?、淋巴瘤）有關(guān)。對于淋巴細(xì)胞增多的患者，尤其是那些持續(xù)存在小到中等大小淋巴細(xì)胞數(shù)量增多的患者，建議篩查感染源（例如埃氏立克次氏體、貓白血病病毒、貓免疫缺陷病毒）。為了確定淋巴細(xì)胞增殖是否為腫瘤來源，建議通過流式細(xì)胞術(shù)進行免疫分型，并通過抗原受體重排PCR（PARR）進行克隆性檢測。
學(xué)習(xí)要點
◆ 涂片復(fù)查的必要性：推薦進行血液涂片復(fù)查以確認(rèn)和補充自動分析儀結(jié)果。
◆ 淋巴細(xì)胞亞群構(gòu)成：犬貓外周血淋巴細(xì)胞以T細(xì)胞為主，混雜B細(xì)胞與自然殺傷細(xì)胞，這些細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下無法區(qū)分亞群。
◆ 正常形態(tài)特征：健康動物淋巴細(xì)胞直徑通常小于中性粒細(xì)胞。
◆ 淋巴細(xì)胞形態(tài)變化：免疫激活（反應(yīng)性）可致中、大型淋巴細(xì)胞輕度增多，中至重度淋巴細(xì)胞擴增需警惕淋巴系統(tǒng)腫瘤（如淋巴瘤、白血?。?/p>
◆ 淋巴細(xì)胞減少原因：淋巴細(xì)胞減少癥通常與應(yīng)激有關(guān)，但也可能由細(xì)胞丟失、裂解、重新分布或免疫缺陷、大劑量類固醇使用導(dǎo)致的細(xì)胞生成減少引起。
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文章來源|Today Sveterinary Practice
翻譯編輯|張秋雁
審 核|郭羽麗
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