中文摘要

目的研究乙型腦炎減毒活疫苗在動物皮下接種后的毒性反應和全身主動過敏反應，考察疫苗安全性。

方法采用Sprague-Dawley大鼠皮下注射單次給藥毒性試驗評價疫苗的急性毒性；采用豚鼠全身主動過敏試驗評價疫苗的致敏性。

結果乙型腦炎減毒活疫苗以1.50 mL/只的劑量單次皮下注射給予大鼠，未見與供試品相關的毒性反應，最大耐受量為1.50 mL/只。乙型腦炎減毒活疫苗分別以0.05 mL/只（低劑量）和0.50 mL/只（高劑量）皮下注射致敏3次，并在末次致敏后14 d以0.10 mL/只（低劑量）和1.00 mL/只（高劑量）靜脈注射激發，可導致豚鼠發生全身主動過敏反應。

結論乙型腦炎減毒活疫苗在動物皮下接種后，毒性反應和全身主動過敏反應符合動物安全性評價要求。

掃碼獲取原文PDF

正文

流行性乙型腦炎（乙腦）是由乙腦病毒引起的中樞神經系統急性傳染病。感染乙腦病毒的病例中至少有30％的患者會出現永久性的神經系統后遺癥，尚無特異性有效療法，預防和控制乙腦傳播的最有效、最經濟的手段是接種乙腦疫苗。

Sprague-Dawley（SD）大鼠和豚鼠是目前普遍用于人用藥物毒理學研究的嚙齒類動物，二者對外源性物質較敏感，是相關供試品在動物致敏性研究中的首選動物模型。武漢生物制品研究所有限責任公司（武漢公司）為了進一步提高乙腦減毒活疫苗的穩定性，進行了疫苗凍干穩定劑處方變更，與昭衍（蘇州）新藥研究中心有限公司一起開展了乙腦減毒活疫苗在SD大鼠中的急性毒性試驗及在豚鼠中的全身主動過敏試驗，旨在評價乙腦減毒活疫苗的非臨床安全性。

1

材料與方法

1.1

供試品

供試品1：乙腦減毒活疫苗（批號：Y201905002-1）由武漢公司研制，凍干粉針劑，復溶后每瓶0.5 mL，包括乙腦病毒、明膠、蔗糖、乳糖、尿素、人血白蛋白等有效成分；供試品2：無人血白蛋白乙腦減毒活疫苗（批號：S202007001）由武漢公司自制，有效成分包括乙腦病毒、明膠、蔗糖、乳糖、尿素。

1.2

實驗動物

無特定病原體（specific pathogen free， SPF）級SD大鼠，訂購24只，實際使用20只，雌雄各半，6~8周齡，雄性大鼠體重為220~240 g，雌性大鼠體重為187~226 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物生產許可證號：SCXK（京）2019-0001，動物質量合格證編號：雌性110011200105485365、雄性110011200105485278。

SPF級Hartley豚鼠，訂購54只，實際使用49只，雄性，4~6周齡，體重為255~294 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物生產許可證號：SCXK（京）2016-0011，動物質量合格證編號：110011200105690358。

1.3

主要試劑及儀器

人血白蛋白購自四川遠大蜀陽藥業有限責任公司，氯化鈉注射液購自湖南科倫制藥有限公司，滅菌注射用水購自安徽雙鶴藥業有限責任公司。YP10001電子天平購自常州市宏衡電子儀器廠，ABS小動物氣體麻醉機購自上海玉研科學儀器有限公司，BCD-215KAN DZ冰箱購自青島海爾股份有限公司。

1.4

大鼠急性毒性試驗

根據給藥前1 d測定的大鼠體重，將20只SD大鼠用計算機系統按性別區段隨機分配為陰性對照組和供試品組，每組10只，陰性對照組大鼠雄性編號為2035381—2035385，雌性編號為2035386—2035390；供試品組大鼠雄性編號為2035391—2035395，雌性編號為2035396—2035400。根據疫苗信息及相關指導原則，陰性對照組大鼠每只單次皮下注射1.50 mL氯化鈉注射液，供試品組大鼠每只單次皮下注射3劑乙腦減毒活疫苗（供試品1），即1.50 mL。給藥當天定義為第1天，第1天給藥后連續肉眼觀察約4 h，觀察內容包括行為活動、皮膚、被毛、眼、耳、鼻、腹部、外生殖器、肛門、四肢、足、呼吸等；給藥第2天至第15天，每天上下午對大鼠各進行臨床觀察1次，觀察內容包括死亡、發病、呼吸、分泌物、糞便情況等；每周1次從飼養籠中取出做詳細臨床觀察，內容包括但不限于行為活動、皮膚、被毛、眼、耳、鼻、腹部、外生殖器、肛門、四肢、足、呼吸等，每周定期對體質量和攝食量進行檢測。第15天觀察期結束后，將所有大鼠實施安樂死，進行大體解剖觀察。

1.5

豚鼠全身主動過敏試驗

根據相關指導原則要求，致敏選擇皮下注射，為臨床擬用途徑；激發選擇能使抗原大量快速進入血液的途徑，即靜脈注射。在給藥前2 d對豚鼠進行體重檢測，將體重相近的豚鼠使用計算機系統隨機分為5組，分組后豚鼠的組別、注射方式和成分、編號詳情以及各組豚鼠給藥劑量和給藥容量見表1。5組豚鼠致敏3次，分別為第1、3、5天，于末次致敏后14 d，對每組前3只豚鼠進行足部靜脈注射激發，若激發后供試品組出現過敏反應癥狀，于當天對每組剩余的豚鼠進行激發，靜脈注射激發后連續觀察30 min，記錄每只豚鼠出現的過敏反應癥狀，判斷過敏反應程度，并依據豚鼠致敏性評價參照表（表2），綜合分析豚鼠的過敏性結果。另取編號為46—49的4只未致敏的豚鼠，其中2只按低劑量組激發量每只靜脈注射0.10 mL供試品1，另外2只按高劑量組激發量每只靜脈注射1.00 mL供試品1。

1.6

統計學分析

應用Excel 2016軟件記錄實驗數據，應用Provantis 9.4.3.0軟件在實驗中對大鼠和豚鼠進行隨機分組，并計算大鼠和豚鼠實驗期間的體重和攝食量的均值、標準差。

2

結果

2.1

大鼠的急性毒性試驗

給藥當天及給藥第2天至第15天，所有大鼠的行為活動、皮膚、被毛、眼、耳、鼻、腹部、外生殖器、肛門、四肢、足、呼吸等均未出現異常變化，所有大鼠的體重均呈增長趨勢，統計數據見表3；所有大鼠的體重及攝食量均未出現異常改變，15 d內大鼠未出現發病和死亡情況。第15天觀察期結束后，將所有大鼠實施安樂死并進行大體解剖，由于局部觀察均未見異常改變，因此未進行組織病理學檢查，動物尸體按醫療廢棄物處理。

2.2

豚鼠的主動過敏試驗

所有豚鼠激發前臨床觀察均未見異常反應，足部靜脈激發后，陰性對照組9只動物均未見過敏反應癥狀，過敏反應呈陰性；陽性對照組9只動物出現不同程度的過敏反應癥狀，其中1只動物死亡，過敏反應呈強陽性至極強陽性；供試品1低劑量組9只動物出現不同程度的過敏反應癥狀，其中1只動物死亡，過敏反應呈弱陽性至極強陽性；供試品1高劑量組9只動物出現不同程度的過敏反應癥狀，其中3只動物死亡，過敏反應呈弱陽性至極強陽性；供試品2即無人血白蛋白對照組9只動物未出現過敏反應癥狀，過敏反應呈陰性，各組動物靜脈給藥激發后的過敏性反應結果詳見表4。

另外，因首次激發注射后，供試品1低、高劑量組均有動物出現過敏反應癥狀，故取其余4只未致敏豚鼠（編號46—49）分別按照低、高劑量組激發量靜脈注射供試品1，結果未觀察到類似過敏反應癥狀。由于無人血白蛋白對照組動物同樣接受高劑量皮下致敏，激發后均未見過敏反應癥狀，因此供試品組豚鼠發生全身主動過敏反應可能為人血白蛋白致敏和激發導致，而不是由乙腦病毒、明膠、蔗糖、乳糖、尿素等成分導致。

3

本研究對乙腦減毒活疫苗的急性毒性進行了系統的評估，旨在為疫苗的安全性和有效性提供科學依據。在本研究條件下，乙腦減毒活疫苗以1.50 mL/只的劑量單次皮下注射給予SD大鼠，未見與供試品相關的毒性反應，最大耐受量為1.50 mL/只，注射疫苗后大鼠無不良反應，體重增加正常，表明疫苗在大鼠體內安全性良好。急性毒性研究實驗動物未出現明顯的行為異常、體重減輕或死亡等毒性表現。

由于供試品中含有穩定劑人血白蛋白，為已知的致敏陽性物質，因此設置了無人血白蛋白對照組。結果顯示，末次致敏后14 d激發供試品低、高劑量組動物均可見全身主動過敏反應；補充試驗4只豚鼠未致敏、只激發，未觀察到類似過敏反應癥狀；皮下注射致敏后無人血白蛋白的供試品足部靜脈激發未出現主動過敏反應癥狀，這與其他含有人血白蛋白的疫苗主動過敏試驗研究結果一致。綜上，對藥物的臨床前過敏性評價，應針對藥物的不同特點合理地進行實驗設計。此外，供試品的臨床擬用劑量為0.50 mL/劑，本研究致敏時供試品低劑量和高劑量分別約為臨床擬用劑量的20倍和200倍（豚鼠以300 g計算，人以60 kg計算），由于豚鼠主動過敏試驗僅是對動物行為學指標進行觀察，在臨床用藥中，人血白蛋白為人體同種蛋白，在臨床使用中產生過敏反應的風險可能性較低，且乙腦減毒活疫苗采用上臂外側三角肌下緣附著處皮下注射，因此豚鼠全身主動過敏試驗臨床前過敏性評價不適宜直接外推到人，對臨床的指導價值有限，僅提示臨床研究中需關注過敏反應的發生。

綜上所述，武漢公司研制的乙腦減毒活疫苗的急性毒性、主動過敏試驗符合動物安全性評價要求。

作者

祁春華1 喬建1 周興1 田小鳳1 張威1 曾帥1 馬春喜2 武傳東2

1武漢生物制品研究所有限責任公司乙腦疫苗室， 武漢 430207；2昭衍（蘇州）新藥研究中心有限公司研發部， 蘇州 215421

引用本文：祁春華, 喬建, 周興等.乙型腦炎減毒活疫苗的動物急性毒性和主動過敏試驗 [J].國際生物制品學雜志, 2025, 48(1): 16-19.

DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20240429-00023

歡迎來到醫食參考新媒體矩陣

2023年疫苗接種攻略

陽過了，該怎么打疫苗？最全接種指導手冊來了

撰寫| 國際生物制品學雜志

校稿| Gddra編審| Hide / Blue sea

編輯 設計| Alice