來源：青椒醫學

巧婦難為無米之炊。工欲善其事必先利其器。

研究方案中「關鍵實驗技術（手段）」的系統性學習和理解，將極大提升你對研究方案的把控能力和設計能力，運籌帷幄，決勝千里，以不變應萬變。

例如你知道 WB 的實驗目的是什么嗎？難道只是檢測表達水平？那么 WB 能定量計算蛋白豐度嗎？如果能那為何又有 ELISA 這種技術？

技術之間有互補性

技術之間，是相互互補的，又不可替代，這需要進一步地理解和學習。理解關鍵實驗技術（手段）的原理特點和實驗目的，和可能的實驗結論，有助于研究方案的創新和優化。

給大家進行了總結，有不足之處請在留言區留言，協助我們更正：

1. 檢測 RNA 分子在組織和細胞空間分布和表達豐度的技術：活細胞動態 RNA 成像技術、單分子 RNA FISH 原位雜交、多分子 RNA Scope 原位雜交技術、細胞核-細胞質分離結合 qPCR、單細胞測序技術、空間轉錄組技術、Northern blot、dot blot 等等；

2. 檢測蛋白分子的空間分布和表達豐度的技術：免疫熒光、免疫組化、細胞核-細胞質分離結合 WB、GFP 標簽融合蛋白示蹤技術、空間蛋白質組學等等；

3. 檢測 DNA 拷貝數、突變與否的技術：FISH 原位雜交、qPCR、基因組測序等等。

4. 檢測某蛋白分子總的表達量（不含空間信息）：ELISA 技術（定量）、western blot 技術（半定量，不準確）；

5. 檢測某蛋白分子的分子量大小（不含空間信息）：分子篩層析法、western blot 技術、雙向 2D 電泳、質譜分析等等；

6. 檢測某蛋白分子的高級結構信息：蛋白結晶后冷凍電鏡解析高級結構、分子對接分析等等；

7. 分子表達干預技術：分子克隆操縱表達技術、病毒載體過表達或者敲減表達（shRNA、siRNA）、點突變技術、CRISPR 敲除或者敲入技術、CRISPRi 沉默技術、功能區分段（truncate）敲除技術、靶蛋白小分子抑制劑或者單抗抑制劑等等；

8. 體內水平探索分子功能：類器官、PDX 模型、裸鼠皮下成瘤、各種 XXX 疾病動物模型、活體成像技術等；

9. 細胞功能探索：細胞增殖、細胞周期檢測、細胞衰老、細胞干性、細胞分化、細胞凋亡、細胞焦亡、炎癥風暴、遷移、侵襲能力，表面受體表達等等；亞細胞結構的囊泡和細胞器的分離和電鏡影像學觀察；

10. 分子間互作實驗方法：RNA、DNA、蛋白之間的互作分析技術如下圖；

11. 新疾病分子、通路的尋找：蛋白質組學、代謝組學、全轉錄組測序、生物信息學分析等等；

關鍵技術上，也要量力而為，一定要符合本單位的硬件技術設施定位，且不可為了新而新，寫一些天馬行空，脫離實際的技術手段上去，評審專家也會提出質疑。

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