前言：NK細胞結合器（NK Cell Engagers，NKCE）和T細胞結合（T Cell Engagers, TCE）的第一性原理是一樣的。

都通過一段具有特異性識別的蛋白，把腫瘤細胞和免疫細胞拉在一起，形成免疫突觸，激活免疫細胞，從而殺掉腫瘤細胞。

在進行藥物設計時，相同的是腫瘤相關靶點，不同的是TCE靶向T細胞常用anti-CD3，而靶向NK細胞的靶點就非常多了。

1、CD16a

CD16a，也稱為FcγRIIIa（Fc受體，可參考《》），在CD56dim NK細胞中大量表達的激活受體，它錨定在NK細胞膜上，并與CD3ζ和/或FcεRIγ鏈相關。

與IgG抗體Fc結合后，CD16a分子發生聚集，導致CD3ζ和/或FcεRIγ的ITAM基序的酪氨酸殘基被Src家族激酶磷酸化。隨后，在NK細胞中觸發信號級聯反應，激活NK細胞。

CD16a具有非常獨特的特點：它不需要其它額外受體的共同結合就能實現對NK細胞的最佳激活。

這一點非常重要，以T細胞結合器為例，某些雙特異性T細胞接合器（BiTE），需要共刺激受體CD28的接合才能完全激活T細胞。

也因此，CD16a是NKCE開發最受歡迎的靶點!

目前許多靶向CD16a產品處于臨床前或臨床試驗中，最有名的公司是Affimed，進展最快的管線AFM13就是一種靶向CD16a的NKCE。

AMF13分子量為110 kDa，結構是由串聯同二聚體組成的四價的雙特異性抗CD30xCD16a，該藥物是抗CD30和CD16a抗體的Fv重鏈和輕鏈結構域通過9個氨基酸的Linker構建的。

臨床試驗表明，AMF13 可有效治療復發或難治性霍奇金淋巴瘤患者，并且在持續治療期間耐受性良好。隨著 AFM13 的有效性得到證實，具有相似結構的NKCEs也被開發出來分別靶向EGFR vIII（AFM22）、EGFR（AFM24）和BCMA（AFM26）。

CD16a在被激活后，會迅速從NK細胞中裂解。CD16a的下調可以促進NK細胞在細胞溶解后脫離，從而能夠參與下一個靶細胞的降解。不過，這個過程也可能會使靶向CD16a的NKCE效果降低。

另外，中性粒細胞的膜結合CD16b受體胞外結構域與CD16a結構域非常相似，靶向CD16a可能引起中心粒細胞的過度活化。而且血清中也存在可溶性CD16，主要是中性粒細胞表面脫落的CD16b和從NK細胞脫落的少量CD16a，這可能與競爭結合NKCEs，從而大大降低其有效性。

2、NKG2D

NKG2D是一種二硫鍵連接的同二聚體C型凝集素樣受體，在NK細胞、NKT細胞、CD8+ T細胞亞群和γδT細胞亞群中表達。其胞內域缺乏ITAM，但與一種稱為DAP10的接頭蛋白結合。

DAP10的尾部包含一個基于酪氨酸的YxxM基序。在Src家族激酶磷酸化酪氨酸后，DAP10誘導PI3K和Grb2/Vav1/PLCγ信號轉導復合體的募集和激活，從而激活NK細胞。

NKG2D介導的腫瘤細胞殺傷比CD16a介導的腫瘤細胞殺傷更快，但其激活強度相對較弱。此外，在缺乏NKG2D配體的腫瘤中，NK細胞的運動能力更差，這表明靶向阻斷腫瘤中NKG2D 配體可能有助于將腫瘤浸潤的NK細胞保留在腫瘤內。

3、Nkp30

Nkp30是一種Ig樣跨膜蛋白，具有單個V型胞外結構域，在靜息和活化的NK細胞中組成型表達。與CD16a類似，Nkp30也通過和CD3ζ和/或 FcεRIγ鏈的二硫鍵連接完成胞內信號轉導。

Nkp30在被接合時觸發NK細胞脫顆粒和細胞因子釋放，與CD16a不同的是Nkp30在NK激活后不會迅速降解，使其成為比CD16a更有希望獲得療效和持久性的靶標。

目前，Compass therapeutics的藥物CTX-4419（靶向BCMA）已經公布了其臨床前的數據，表現出了優秀抗MM腫瘤效果。

CTX-4419的結構為兩個抗Nkp30的Fab片段連接在抗BCMA IgG1 抗體重鏈的C端。

不過當Nkp30用作NCKE開發的靶標時，Nkp30的較低表達量可能是一個問題。研究表明，每個NK細胞表面大約1000個Nkp30分子，遠低于 CD16a的密度（~7萬個）。

4、Nkp46

Nkp46是與Nkp30具有許多相似特征的NK激活蛋白。但Nkp46具有兩個細胞外C型Ig結構域，而Nkp30只有一個Ig結構域。

單獨結合Nkp46僅微弱激活NK細胞，與其他激活受體（如2B4、DNAM1或CD2）共同結合可顯著增強NK細胞活化。

Nkp46在多種癌癥（包括肺癌、急性髓性白血病和乳腺癌）的腫瘤浸潤 NK細胞中表達，因此有望成為NKCE開發的靶標。

Cytovia therapeutics的四價Nkp46xCD38（CYT-338）正在開發中。CYT-338具有IgG1骨架，其Fc區介導NK細胞ADCC，Fab區域識別 Nkp46，靶向腫瘤抗原CD38的Fab片段對稱地附著在IgG骨架重鏈的N 端（FLEX-NK）。在IgG的恒定區引入突變，以最大限度地減少重鏈和輕鏈的錯配。

CYT-338與MM細胞系的結合比Daratumumab 高3倍，并且顯示出更強的劑量依賴性。

5、Nkp80

Nkp80又稱為KLRF1，是一種類似于NKG2D的同型二聚體C型凝集素樣受體，它主要在NK細胞中表達。

Nkp80的胞漿尾部帶有一個半ITAM 樣序列（YxxL），結合后，該序列與Lck和Syk結合。Nkp80唯一已知的天然配體是C型凝集素（AICL）。

然而，相對較低的表面表達Nkp80（每個NK細胞約5000個）可能需要一些特殊的NKCE設計考慮，如增強靈活性和多價，以提高靶向Nkp80 的功效。

6、NKG2C

NKG2C，也稱CD159a，是一種特異性識別HLA-E的激活受體。它與 CD94形成異二聚體，并通過其跨膜結構域中帶正電荷的殘基與DAP-12 結合。

NKG2C主要在缺乏NKG2A的成熟NK細胞中表達，其表達增加表示“記憶”NK 細胞表型。

與CD16a類似，NKG2C可以單獨激活NK細胞。不過NKG2C在激活NK 細胞后不會迅速降解，使其成為 NKCE開發的有前途的候選者。

然而，與CD16a相比，NKG2C的局限性是它的表達水平較低且可變，因此，由于NKG2C+ NK細胞群較少，NKG2C-NKCE 可能對某些患者無效。

7、其它潛在激活受體

其它可能的受體包括KIR2DS和KIR3DS，CD160、DNAM-1以及2B4等。

KIR2DS和KIR3DS是抑制性NK細胞Ig樣受體（KIR）家族成員，不過他們是兩種激活受體。與其他KIR共享兩~三個Ig樣胞外結構域，但胞內沒有ITIM。研究表明，KIR2DS的表達與NK活化和細胞因子產生呈正相關。因此，KIR2DS和KIR3DS 是 NKCE 開發的潛在候選者。然而，和抑制KIR的胞外結構域的高同源性可能使獲得區分這兩種類型KIR的特異性CDR序列變得具有挑戰性。

CD160是一種Ig樣跨膜蛋白，類似KIR受體，在一部分具有高細胞毒性的NK細胞和一部分T細胞中表達。與其配體HLA-C結合后，CD160可活化NK細胞，導致高效的腫瘤細胞殺傷和細胞因子釋放， 使其成為NKCE 開發的潛在靶標。然而，CD160已被證明在激活NK細胞后發生下調。

DNAM-1，也稱為CD226，是另一種在NK細胞、T細胞和某些髓系細胞中組成型表達的激活受體。它是一種跨膜糖蛋白，具有兩個Ig樣結構域。DNAM-1 在 NK 細胞上的表面表達較低。因此，未來DNAM-1 參與的 NKCE 開發需要更具體的設計策略。

2B4 （SLAMF4，CD244）屬于SLAM（信號轉導淋巴細胞激活分子）家族，在NK和CD8+ T細胞中表達。它有兩個Ig樣胞外結構域和一個細胞質尾部，具有四個基于免疫受體酪氨酸的開關基序（ITSM），它可以與Nkp46、NKG2D和DNAM-1協同作用，從而顯著增強NK細胞活化。