1.背景介紹

Protein L

蛋白L（Protein L）是一種從大型消化鏈球菌（Peptostreptococcus magnus）中分離到的一種多結構域細胞壁蛋白，與抗體的 kappa 輕鏈的可變區域相互作用，特別是 K1、K3 和 K4 輕鏈，使其能夠與大約 67% 的人免疫球蛋白和 99% 的小鼠免疫球蛋白結合[1]。

Diamond Protein L親和層析填料

Diamond Protein L是將 Protein L 配基同高剛性瓊脂糖基架偶聯后制成的一種新型親和層析介質。相較于常規介質，高剛性瓊脂糖基架流速更快，反壓更低。Protein L 配基與抗體 kappa 輕鏈的可變區有很強的親和性，所以博格隆Diamond Protein L親和層析填料適用于從大批量細胞培養液中捕獲各種不同大小的抗體片段，如 F(ab‘)2、Fab、單鏈可變片段 （scFv）和半抗。

Fig. 1 抗體IgG和抗體片段示意圖

博格隆Diamond Protein L親和層析填料的主要特性：

• 高剛性瓊脂糖基架：高流速，可提高生產效率
• 高特異性的kappa輕鏈：可高效捕獲廣泛選擇的抗體和抗體片段
• 高結合載量：能減少工藝時間和介質使用量，降低生產成本

博格隆Diamond Protein L親和層析填料技術參數：

+顆粒大小呈正態分布，平均顆粒大小是填料體積分布累計的中值粒徑

++線性流速100cm/h，柱高10cm，緩沖液條件：20mM PB、0.15M NaCl，pH7.2

+++2%苯甲醇僅用于國外運輸或者客戶指定

2.實際應用案例—半抗親和層析

• 層析填料：Diamond Protein L
• 樣品和上樣量：某半抗，30mg/mL填料
• 平衡緩沖液：20mM Tris-HCl，0.15M NaCl，pH7.2
• 洗脫緩沖液：50mM Gly-HCl，pH2.9
• CIP緩沖液: 15m M NaOH

Fig. 2 Diamond Protein L親和層析圖譜

Fig. 3 Diamond Protein L親和層析純化結果

使用Tips

緩沖液選擇：

• 結合緩沖液：通常采用中性緩沖液，如：20mM PB 0.15M NaCl pH7.2
• 洗脫緩沖液：采用低 pH 緩沖液，如：0.1M 檸檬酸鈉 pH2.0-3.5

提高洗脫產品純度

在洗脫步驟可以通過pH線性梯度洗脫，優化出合適的洗脫pH范圍。對于具有挑戰性的抗體或抗體片段純化中通過優化洗脫緩沖液濃度，可以進一步去除洗脫產品中的聚集體等產品相關雜質[2]。

在位清洗

如果洗脫產品收率異常，建議在 CIP 之前應先進行再生。在用 NaOH 進行 CIP 之前，建議先用中性 pH 溶液平衡層析柱，避免低pH 緩沖液與高pH NaOH 溶液直接接觸可能導致柱內溫度升高。

3.相關產品信息

Fig. 4 Diamond Protein L親和層析填料產品訂購表

Fig. 5 Diamond Protein L親和層析預裝柱產品訂購表

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參考文獻：

[1] Serene W. Chen, Darryl Tan, et.al (2020) Investigation of the effect of salt additives in Protein L affinity chromatography for the purification of tandem single-chain variable fragment bispecific antibodies, mAbs

[2] Chen Chen, Tetsuya Wakabayashi et.al(2019) Controlled conductivity at low pH in Protein L chromatography enables separation of bispecific and other antibody formats by their binding valency, mAbs

關于博格隆

博格隆成立于2008年，是一家專注于為分離純化提供高質量層析介質的高新技術企業，是中國較早具備大規模生產分離純化介質能力的企業之一。博格隆所提供的產品涵蓋各類分離純化介質、預裝柱、實驗室及工業生產級空柱、微載體，同時提供分離純化工藝開發服務及填料定制。

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